細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文
篇一：實(shí)驗(yàn)五 微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定及生長(zhǎng)曲線的繪制
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
學(xué)習(xí)了解微生物生長(zhǎng)量測(cè)定的方法
學(xué)習(xí)了解細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的繪制方法
學(xué)習(xí)掌握血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用方法
（一）微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定
計(jì)數(shù)法 重量法 生理指標(biāo)法
1、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
（1）利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)
（2）涂片計(jì)數(shù)
2、活菌菌落計(jì)數(shù)法
3、濾膜法
（二）細(xì)菌生長(zhǎng)曲線
將單細(xì)胞細(xì)菌接種到恒定容積的液體培養(yǎng)基中，不補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物或移去培養(yǎng)物，細(xì)菌以二分裂方式繁殖，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，可畫出一條反映細(xì)菌在整個(gè)培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線，稱為生長(zhǎng)曲線（growth curve）
篇二：細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
掌握測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的.方法。
二、實(shí)驗(yàn)器具
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、微量加樣器、eppendorf管、吸頭、吸頭盒、顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、載玻片、蓋玻片、吸管、試管架、普通顯微鏡、細(xì)胞懸液、0.4%臺(tái)盼藍(lán)。
三、實(shí)驗(yàn)方法
1. 培養(yǎng)細(xì)胞：首先在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)分別接種相同數(shù)量的細(xì)胞，計(jì)數(shù)并記錄接種的細(xì)胞懸液密度，接種時(shí)間記為0小時(shí)。
2. 計(jì)數(shù)細(xì)胞密度：從接種時(shí)間算起，每隔24小時(shí)計(jì)數(shù)3孔的細(xì)胞密度，算出平均值。為提高準(zhǔn)確率，對(duì)每孔細(xì)胞可計(jì)數(shù)2-3次，如此操作至第七天結(jié)束。
3. 繪制曲線：以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)、細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)，將全部結(jié)果在坐標(biāo)紙上繪圖，即得所培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。
篇三：MTT法繪制生長(zhǎng)曲線
實(shí)驗(yàn)材料：
1，5%FBS-L-DMEM, 5x104個(gè)/ml細(xì)胞懸液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7個(gè),酶標(biāo)儀,50ml離心管，1.5ml離心管，0.22μm濾膜，錫箔紙，MTT工作液（1ml/管）
實(shí)驗(yàn)步驟：
1， 分別選取生長(zhǎng)良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制備成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為5x104/ml。接種到96孔板，每孔接種200μl細(xì)胞懸液進(jìn)行培養(yǎng)（每孔1x104細(xì)胞）。
2， 培養(yǎng)16-48后，每天選擇6個(gè)培養(yǎng)孔各自加入MTT溶液（5mg/ml）20μl，37℃繼續(xù)孵育。
3， 孵育4h后終止培養(yǎng)，吸出孔內(nèi)上清，此時(shí)應(yīng)該傾斜96孔板，用槍頭小心的將上清液吸去，不可吸去下面的結(jié)晶顆粒，慢慢吸去。每孔加入150μlDMSO,室溫振蕩10min，使結(jié)晶充分溶解，于試驗(yàn)孔平行設(shè)不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對(duì)照1孔。
注意事項(xiàng)：
【1】 1, 兩種方法分離小型豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的比較
分別取兩組0,1,3代細(xì)胞，制成1x103的細(xì)胞懸液，接種到96孔板，每孔細(xì)胞懸液200微升，置37℃、5%CO2飽和濕度孵箱內(nèi)孵育，各組每24小時(shí)分別取出4孔，每孔加入MTT（2mg/ml）20微升 37℃孵育，4h后吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150微升分析純的二甲基亞砜，移至酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上振蕩10min,用分光光度計(jì)在492nm波長(zhǎng)處測(cè)定每孔的吸光度值（OD492），以O(shè)D(492)值為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)繪制生長(zhǎng)曲線
【2】 來(lái)自：SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究
大鼠MSCs生長(zhǎng)曲線測(cè)定：為了定量測(cè)定大鼠BMSCs的生長(zhǎng)狀況，對(duì)來(lái)源于同一動(dòng)物的原代細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)。分別選取生長(zhǎng)良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制備成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為5x104/ml。接種到96孔板，每孔接種200μl細(xì)胞懸液進(jìn)行培養(yǎng)（每孔1x104細(xì)胞）。次日起每天選擇6個(gè)培養(yǎng)孔各自加入MTT溶液（5mg/ml）20μl，37℃繼續(xù)孵育4h后終止培養(yǎng)，吸出孔內(nèi)上清，每孔加入150μlDMSO,室溫振蕩10min，使結(jié)晶充分溶解，于試驗(yàn)孔平行設(shè)不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對(duì)照1孔。在酶標(biāo)儀上選擇570nm波長(zhǎng)，以空白孔調(diào)零，測(cè)定各孔吸光度（A）值，連續(xù)測(cè)7天，以時(shí)間為橫軸，A值為縱軸繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
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